蛋白质技术手册

第一章 蛋白质分离的准备
1?1 引言
1?2 缓冲液
1?2?1 缓冲液的性质
1?2?2 缓冲液配制
1?2?3 浓度对缓冲液pH值的影响
1?2?4 某些缓冲液使用时的注意事项
1?2?5 防止缓冲液受污染
1?2?6 水的纯度
1?3 盐、金属离子和螯合剂
1?3?1 离子强度
1?3?2 二价阳离子
1?3?3 螯合剂
1?4 还原剂
1?4?1 总则
1?4?2 特殊情况
1?5 去垢剂
1?5?1 去垢剂的分类
1?5?2 蛋白质溶解的初始操作步骤
1?6 蛋白质的环境因素
1?6?1 表面效应
1?6?2 温度
1?6?3 储存
1?7 蛋白酶抑制剂
1?7?1 常用抑制剂
1?7?2 蛋白酶抑制剂混合使用
第二章 蛋白质的提取和溶解
2?1 引言
2?2 细胞破碎和蛋白质溶解
2?2?1 匀浆
2?2?2 超声
2?2?3 高压匀浆
2?2?4 研磨
2?2?5 (高速)珠磨
2?2?6 酶溶
2?2?7 化学渗透
2?2?8 其他方法
2?3 包涵体蛋白质的溶解
2?3?1 包涵体蛋白质的溶解及复性
2?3?2 防止包涵体形成
第三章 蛋白质浓度测定
3?1 280纳米(A280)光吸收法
3?1?1 提要
3?1?2 设备
3?1?3 试剂
3?1?4 操作步骤
3?1?5 注意事项
3?2 Bradford检测法
3?2?1 提要
3?2?2 设备
3?2?3 试剂
3?2?4 操作步骤
3?2?5 注意事项
3?3 Lowry检测法
3?3?1 提要
3?3?2 设备
3?3?3 试剂
3?3?4 操作步骤
3?3?5 注意事项
3?4 二喹啉甲酸(BCA)检测法
3?4?1 提要
3?4?2 设备
3?4?3 试剂
3?4?4 操作步骤
3?4?5 注意事项
3?5 斑点滤膜结合法
3?5?1 概述
3?5?2 操作步骤
3?6 干扰物质表
第四章 蛋白质溶液的浓缩
4?1 分析方法
4?1?1 三氯醋酸沉淀法
4，1?2 丙酮沉淀法
4?1?3 免疫沉淀法
4?2 制备方法
4?2?1 硫酸铵沉淀法
4?2?2 有机溶剂沉淀法
4?2?3 聚乙二醇沉淀法
4?2?4 超滤法
4?2?5 透析法
4?2?6 离子交换层析和冷冻干燥法简述
第五章 变性条件下的凝胶电泳
5?1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
5?1?1 原理
5?1?2 设备
5?1?3 制胶
5?1?4 制备样品和上样
5?1?5 电泳
5?1?6 考马斯亮蓝染色
5?1?7 银染色
5?1?8 干胶
5?1?9 讨论
5?1?10 安全注意事项
5?2 梯度胶
5?2?1 引言
5?2?2 仪器
5?2?3 凝胶的制备
5?3 SDS-尿素胶
5?3?1 引言
5?3?2 制胶
5?4 其他方法
5?4?1 放射性标记样品的检测
5?4?2 分子量的测定
5?4?3 蛋白质定量
5?4?4 电泳后蛋白质的洗脱
第六章 非变性条件下的凝胶电泳
6?1 引言
6?2 不连续非变性凝胶电泳
6?2?1 设备
6?2?2 制胶
6?2?3 样品制备
6?2?4 电泳
6?2?5 凝胶染色
6?2?6 连续非变性凝胶电泳
6?3 相关的方法
6?3?1 蛋白质分子量的测定
6?3?2 电泳后酶活性的测定
第七章 等电聚焦和双向凝胶电泳
7?1 等电聚焦
7?1?1 原理
7?1?2 主要仪器
7?1?3 灌制等电聚焦凝胶
7?1?4 样品制备和上样
7?1?5 等电聚焦电泳
7?1?6 聚焦后处理
7?1?7 天然等电聚焦电泳的修正方案
7?1?8 讨论
7?2 固相pH梯度等电聚焦电泳
7?2?1 简介
7?2?2 仪器
7?2?3 制备等电聚焦凝胶
7?2?4 样品制备和上样
7?2?5 等电聚焦电泳
7?2?6 聚焦后处理
7?2?7 讨论
7?3 双向凝胶电泳
7?3?1 简介
7?3?2 仪器
7?3?3 操作步骤
7?3?4 讨论
第八章 蛋白质的毛细管电泳分析
8?1 引言
8?2 影响分离效率的几个因素
8?3 柱制备技术
8?3?1 键合涂层
8?3?2 吸附涂层
8?4 不同分离条件的影响
8?5 毛细管电泳检测器
8?6 实验操作
8?6?1 实验步骤
8?6?2 操作条件选择
8?6?3 毛细管区带电泳
8?6?4 毛细管等电聚焦
8?6?5 毛细管凝胶电泳
8?6?6 亲和毛细管电泳
8?7 应用实例
8?7?1 聚丙烯酰胺涂层毛细管电泳柱的制备
8?7?2 毛细管凝胶电泳分离蛋白质
8?7?3 毛细管等电聚焦
第九章 免疫印迹
9?1 引言
9?1?1 免疫印迹用膜
9?1?2 将蛋白质固定在膜上的其他应用
9?2 免疫印迹操作
9?2?1 仪器
9?2?2 试剂
9?2?3 操作步骤
9?2?4 其他检测方法的修正方案
9?2?5 总蛋白质染色
9?2?6 免疫印迹清除
9?3 讨论
9?3?1 膜的储存
9?3?2 转移异常
9?3?3 免疫印迹的其他应用
第十章 离子交换层析
10?1 蛋白质纯化
10?1?1 引言
10?1?2 方法
10?2 蛋白质溶液的浓缩
10?3 批量层析
第十一章 凝胶过滤层析
11?1 蛋白质的纯化
11?1?1 引言
11?1?2 方法
11?2 更换蛋白质的缓冲液
第十二章 亲和层析
12?1 引言
12?2 亲和柱的制备
12?2?1 配基固相化技术
12?2?2 非特异洗脱的策略
12?3 特异分离技术
12?3?1 抗体
12?3?2 核酸
12?3?3 凝集素
12?3?4 染料配基
12?3?5 固相化金属亲和层析
12?3?6 疏水作用层析
第十三章 蛋白质的晶体培养――悬滴结晶
13?1 引言
13?2 悬滴结晶法
13?2?1 结晶原理
13?2?2 第一阶段操作步骤
13?3 设计最优结晶方案
13?3?1 稀溶液基质的微调
13?3?2 初始筛选的扩展
13?3?3 蛋白质结晶的灵活性与困难
第十四章 cDNA法推断蛋白质的一级结构
14?1 引言
14?2 一般策略
14?2?1 蛋白质的纯化和肽段氨基酸序列分析
14?2?2 引物的设计
14?2?3 用PCR扩增目的cDNA片段
14?2?4 cDNA的克隆及测序
14?2?5 cDNA序列的分析及蛋白质一级结构的确定
14?3 PK-120的纯化及肽段氨基酸序列分析
14?3?1 仪器及材料
14?3?2 PK-120的纯化
14?3?3 分离纯化肽段及测定氨基酸序列
14?4 部分分解多肽两端有关的PCR法筛选PK-120基因
14?4?1 仪器及材料
14?4?2 引物设计
14?4?3 PCR扩增
14?4?4 凝胶电泳及提取DNA
14?4?5 测定碱基序列
14?5 PK-12O cDNA克隆
14?5?1 仪器及材料
14?5?2 杂交反应
14?5?3 cDNA推测PK-120一级结构的特征
附录1 常用化学物质分子量
附录2 一些蛋白质的分子量和等电点
附录3 硫酸铵沉淀剂表
附录4 分光光度曲线