真核生物转录调控：概念、策略与方法

前言
绪言
缩略词
1真核基因转录调控的基础知识
引言
基因调控的基本模型
概念和策略：Ⅰ启动子和基本转录机构
概念和策略：Ⅱ激活因子和抑制因子
概念和策略：Ⅲ染色质和基因调控
概念和策略：Ⅳ增强体
2初始策略
引言
概念和策略
基因调控分析的首要步骤
达到特定目标所需投入的时间和资源
论证分析的可行性
进行转录调控分析
总结
3MRNA丰度的调控模式
引言
概念和策略
转录起始与MRNA稳定性
转录延伸
前提MRNA差异剪接.MRNA的转运和多聚腺苷酸化
技术
4转录起始位点的定位
引言
概念和策略
初始阶段需要考虑的问题
引物延伸
RNASE保护
S1核酸酶分析
CDNA末端的快速扩增
技术
5启动子的功能性分析方法
引言
概念和策略
分析方法的选择：各种分析方法的优缺点
瞬时转染分析
通过染色体整合的稳定转染分析
技术
哺乳动物细胞的常用转染方法
常用的报道酶分析法
6远距离调控区的鉴定和分析
引言
概念和策略
DNASEI超敏感性分析
基质附着区的鉴定
远距离调控区的功能性分析法
用语表征距离调控区的功能性分析
7鉴定调控区中的顺式作用DNA元件
引言
概念和策略
通过综合性突变分析鉴定调控元件
利用体内或题外蛋白质-DNA相互作用鉴定调控元件
通过数据库分析鉴定调控元件
诱变技术
8DNA结合蛋白的鉴定及其基因的分离
引言
鉴定DNA结合蛋白的概念和策略
数据库检测法
粗制细胞裂解物的蛋白质-DNA相互作哟内分析方法的建立
克隆编码DNA结合蛋白基因的概念和策略
通过蛋白质纯化法和肽序列分析法进行克隆
通过不需要进行蛋白质-DNA相互作用分析的方法进行克隆
9确证蛋白质-DNA相互作用的功能相关性
引言
概念和策略
体外蛋白质-DNA复合题的丰度
DNA结合蛋白和靶基因的相对表达模式
蛋白质结合所需核苷酸和调控元件火星所需核苷酸的相关性
DNA结合蛋白的过量表达对报道基因或内源基因的反式激活
与相邻调控区相结合的蛋白质间协同结合和协同效应
基因组足迹模式和提外阻击模式的比较
蛋白质-DNA相互作用的相对亲和力
基因剔除或反义实验
显性失活突变体
体外转录方法
体内蛋白质-DNA交联
改变特异性的实验
10内源调控区的体内分析
引言
概念和策略
序列特异性蛋白质-DNA相互作用的体内分析
核小体的定位和重建
DNA甲基化
基因的亚核定位
技术
11合成重组转录因子的方法
引言
概念和策略
原核表达体系
克服E.COLI中表达问题的策略
合成大的调控蛋白
合成小量的粗制蛋白质
大分子符合体的合成与纯化
适当表达体系的选择
12鉴定和分析转录因子结构域
引言
概念和策略：定义结构域
诱变的基本原理
基因激活因子的机构域
分离激活因子的DNA结合机构域和激活结构域
DNA识别亚结构域和寡聚化亚结构域的划分
概念和策略：蛋白质-蛋白质相互作用
激活结构域和共激活因子及通用因子的相互作用
亲和层喜
改变特异性的遗传体系
基本转录机构的结构-功能分析
技术
13调节性转录因子结合DNA的理论.特征和模型
引言
概念和策略
DNA-蛋白质相互作用的基本理论和实例
DNA-蛋白质相互作用的分析和模型
启动子特异性多组分核蛋白复合体的分析
技术
14用于体起转录分析的粗制系统和分级分离系统
引言
概念和策略
抽提物的制备
转录分析
分级分离系统
技术
核抽提物和全细胞抽提物的制备
体外转录分析
转录因子的纯化
15研究转录复合体组装的方法
引言
概念和策略
基本前起始复合体的形成
开放复合体的形成.起始和启动子撤离
活化的复合体在启动子的组装
技术
附录
附录1注意事项
附录2供应商
附录3商标