基因打靶技术

1 基因打靶技术的发展简史及其应用前景
1.1 基因打靶技术的概念
1.2 胚胎干细胞技术的发展
1.3 同源重组技术的发展
1.4 基因打靶技术在生物医学研究中的应用前景
2 基因打靶的策略及载体设计
2.1 完全基因剔除
2.2 基于CRE-LOXP重组酶系统的条件基因打靶技术
2.3 用基因打靶技术引入精细突变
2.4 大片段染色体的重排和删除
2.5 随机基因剔除-基因诱捕
2.6 ENU诱导点突变与大规模基因突变和功能研究
2.7 利用基因敲入技术制备转基因动物
3 中靶胚胎干细胞的筛选
3.1 胚胎干细胞的分离和培养
3.2 打靶载体转染ES细胞
3.3 ES细胞的体外诱导分化研究
4 由中靶细胞突得突变体动物的方法
4.1 通过囊胚显微注射法获得嵌合体小鼠
4.2 通过胚胎聚合法获得完全ES细胞来源的胚胎或嵌合体小鼠
5 基因打靶在现代生物学研究中的应用实例
5.1 应用基因剔除技术研究SMADS基因的功能
5.2 葡萄糖激酶基因剔除及成年型糖尿病模型
5.3 人类疾病的基因打靶小鼠模型
5.4 核移植法研制突变体动物
6 基因打靶技术存在的问题及对策
6.1 打靶载体设计引起的问题
6.2 表型解释中存在的问题
6.3 关于解决基因打靶研究中粗乃的问题的建议
6.4 总结
7 附录1 常用实验方法
7.1 靶基因CDNA探针的克隆
7.2 靶基因基因组DNA片段的筛选和克隆
7.3 NORTHERN杂交分析
7.4 小鼠的基因型分析
7.5 常规组织学分析
7.6 免疫组化分析
7.7 普通原位杂交
7.8 整体原位杂交
7.9 小鼠的全骨架制备
7.1 利用藏红O染色检测小鼠骨切片中蛋白多糖的含量
7.11 小鼠组织的LAC Z染色
8 附录2 常用溶液和缓冲液的配制
8.1 常用试剂的配制
8.2 杂交试验中用于降低背景的封闭液
8.3 蛋白水解酶类
8.4 M2和M16溶液的配制
9 附录3 常用参考书和数据库
9.1 常用参考书
9.2 常用基因打靶和转基因小鼠资源网站
后记