分子生物学基本技能和策略

第一篇 基因工程原理
概论
0?1分子生物学概述
0?2基因工程概述
0?3基因重组技术的应用前景
第1章 分离目的基因和基因载体
1?1目的基因的获取
1?2基因载体的选择
第2章 限制性内切核酸酶的应用
2?1概念
2?2序列特征
2?3作用方式
2?4同裂酶和同尾酶
2?5影响酶切活性的主要因素
第3章 目的基因和基因载体的体外连接
3?1DNA连接酶
3?2连接方式
第4章 重组DNA转化宿主细胞
4?1受体细胞的选择
4?2重组基因的导入方法
4?3转化细胞的扩增
第5章 重组体阳性克隆的筛选
5?1遗传检测法
5?2物理检测法
5?3菌落杂交筛选法
5?4免疫化学检测法
5?5DNA-蛋白筛选法
5?6PCR法确定重组体
5?7DNA序列分析
5?8真核宿主细胞的筛选标记
第6章 外源基因表达及表达产物的检测
6?1宿主细胞
6?2表达载体
6?3表达产物和表达水平
6?4表达产物的检测
6?5表达蛋白质的分离纯化
第二篇 常用生化技术原理
第1章 电泳技术
1?1电泳基本原理
1?2影响泳动度的主要因素
1?3常用的电泳方法
第2章 层析技术
2?1概述
2?2层析原理
2?3柱层析法
2?4凝胶过滤层析法
2?5气相色谱和高效液相色谱
第3章 分光光度技术
3?1光学原理
3?2Lambert-Beer定律
3?3分光光度计的基本构造
3?4紫外可见光分光光度计
3?5荧光分光光度计
3?6酶标仪
第4章 离心分析法
4?1离心机基本原理
4?2离心机的分类
4?3离心机的结构
4?4离心方法
第5章 透析
5?1透析膜(袋)
5?2溶剂
5?3物理条件
第三篇 分子生物学常用技术
第1章 目的基因和基因载体的分离
实验1 质粒DNA的提取
实验2 真核生物基因组DNA的提取
实验3 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验4 DNA的定量分析
实验5 PCR基因扩增
实验6 哺乳动物DNA的纯化与鉴定
实验7 基因组DNA文库的建立
第2章 酶切与连接
实验1 限制性内切核酸酶的酶切与鉴定
实验2 载体与目的基因的连接
第3章 重组DNA的转化与筛选
实验1 重组质粒转化大肠杆菌及初步筛选
实验2 核酸探针的制备和标记
实验3 原位杂交法进行重组质粒的筛选
实验4 Northern杂交
实验5 真核细胞基因转染和筛选
实验6 转染细胞的筛选
第4章 外源基因在宿主细胞中的表达
实验1 在大肠杆菌（E.coli）表达蛋白产物
实验2 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验3 蛋白质杂交法检测表达蛋白
附:常用生物化学实验技术
实验1 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验2 凝胶过滤法测定蛋白质相对分子质量
实验3 透析实验
实验4 双缩脲反应
实验5 胰岛素及肾上腺素对血糖含量的影响
实验6 血糖含量测定
实验7 蛋白质定量测定
第四篇 分子生物学实验室基本操作和数据
第1章 分子生物学实验室常规仪器设备
1?1实验室的常规仪器及设施
1?2离心机室的装备
1?3分析仪器室的设置
1?4核素实验室
1?5细胞培养室
1?6暗室
1?7冷室
第2章 实验室基本操作
2?1玻璃仪器的洗涤
2?2搅拌和振荡
2?3容量玻璃仪器的使用方法
2?4分光光度计的使用
2?5干燥箱和恒温箱
2?6电热恒温水浴
2?7酸度计
第3章 实验室常用数据
第4章 常用载体图谱
主要参考文献