细胞生物学实验指导

第一部分 细胞生物学实验方法和技术介绍
第一章 光学显微镜
一、明视野显微镜
二、暗视野显微镜
三、相差显微镜
四、微分干涉差显微镜
五、荧光显微镜
六、偏光显微镜
七、激光扫描共焦显微镜
八、多光子荧光显微镜
第二章 电子显微术
一、透射电子显微术
二、扫描电子显微术
三、电镜x射线微区分析技术
第三章 定量细胞术
一、显微镜光度术
二、流式细胞术
三、图像处理和分析技术
第四章 显微摄影
一、显微摄影装置
二、显微摄影程序
三、彩色显微摄影
四、荧光摄影
第五章 放射性核素示踪技术
一、放射性核技术的核物理基础知识
二、生物学中放射性核素示踪技术
三、放射性样品的测量仪器及方法
四、放射性核素示踪实验中的放射卫生防护
第六章 细胞培养技术
一、组织培养的概念
二、组织培养简史
三、组织培养的基本条件
四、培养方法
五、培养细胞的生物学
第七章 凋亡细胞的识别
一、细胞凋亡与细胞坏死在形态学和生化特征方面的区别
二、调亡细胞的分子作用机制简介
三、观察凋亡细胞的方法
四、研究细胞凋亡的生物学意义
第八章 绿色荧光蛋白
一、GFP的发现
二、GFP的性质
三、GFP的发光机制与GFP突变蛋白
四、GFP的优点
五、GFP的应用前景
六、存在的问题
第九章 反转录聚合酶链式反应
一、逆转录酶
二、反转录引物
三、模板RNA
四、反转录PCR（RT-PCR）的应用
五、存在的问题
第二部分 学生实验
实验1 口腔上皮细胞的显微镜观察
一、用荧光显微镜观察口腔上皮细胞的线粒体和细胞核
二、用相差显微镜观察口腔上皮细胞
三、用暗视野显微镜观察牙垢中的微生物
实验2 电镜超薄切片
实验3 动物细胞培养
一、清洗与灭菌
二、培养基的配制
三、Hanks、D-Hanks液和消化液（胰酶液）的配制
四、细胞传代培养
五、生长曲线的测定
六、细胞冻存与复苏
七、原代培养
八、新生牛血清的筛选
九、几种常用的细胞同步化方法
实验4 显微摄影
实验5 定量细胞测量的样品制作
一、细胞DNA含量定量测量的样品制作（Feulgen反应——用于显微镜光度计和图像分析仪的透射光测量）
二、细胞DNA含量定量测量的样品制作（PI荧光标记法——用于流式细胞仪的荧光测量）
实验6 小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
一、小鼠骨髓染色体的制备
二、染色体c带的制备
实验7 保护性胶显影剂和硝酸银染核仁组织区的一步染色法
实验8 细胞骨架观察
一、考马斯亮蓝R250（CoomassieblueR250）染色法观察微丝
二、甲基罗丹明标记的鬼笔环肽染色法观察微丝
三、动物细胞微管观察
四、植物细胞微管观察
实验9 HeLa细胞与鸡红细胞的融合实验
实验10 小鼠巨噬细胞吞噬羊红细胞实验
实验11 着丝点蛋白的间接免疫荧光染色法
实验12 三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡的形态和生化特征观察
一、三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡的形态观察
二、三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡的生化特征观察
实验13 利用脂质体转染技术对HeLa细胞中重组GFP进行观察
实验14 利用RT-PCR技术检测HeLa细胞中β-actin的表达
实验15 放射性核素示踪技术及其应用
一、放射性核素制剂的衰变校正计算
二、几何位置对测量的影响及外照射防护原则
三、3H-TdR掺入细胞DNA的液闪测量
四、3H-TdR掺入DNA的显微放射自显影观察
五、皮质醇放射免疫分析
附录
附录1 显微镜物镜、目镜常用的一些符号说明
附录2 电镜超薄切片缓冲液、固定液和染液的配制
附录3 动物细胞培养
附录4 显微摄影和显微放射自显影用溶液的配制
附录5 常用荧光探针介绍
附录6 用于Feulgen反应的试剂配制
附录7 磷酸缓冲盐（Phosphate-bufferedSaline，PBS，pH7．4）溶液的配制和各种pH值Tris-HCI缓冲液的配制
附录8 用于染色体和C带制备的溶液配制
附录9 用于细胞骨架观察的溶液配制
附录10 用于动物细胞融合和吞噬实验的试剂配制
附录11 防荧光褪色固片介质、细胞粘贴和封片剂
附录12 对HeLa细胞中重组GFP进行观察的试剂配制
附录13 利用RT-PCR技术对HeLa细胞中β-actin的表达进行检测的试剂配制
附录14 放射性核素示踪技术常用数据