基因克隆技术在制药中的应用

上篇技术篇
第一章 基因克隆技术概述1
第一节基因克隆技术1
一、基因克隆技术的诞生和兴起1
二、基因克隆技术的特点与步骤3
第二节基因克隆技术早期开创性研究成就5
第二章 基因克隆技术制药中常用的工具酶8
第一节限制性核酸内切酶8
一、限制酶的发现8
二、限制酶的类型9
三、限制酶的命名10
四、Ⅱ型限制酶的特性10
五、DNA的单酶切与限制片段末端连接13
第二节DNA连接酶14
一、DNA连接酶连接作用的特点14
二、基因工程中常用的连接酶14
三、DNA连接酶连接作用的分子机理15
第三节DNA聚合酶16
一、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ16
二、Klenow大片段酶18
三、T4噬菌体DNA聚合酶19
四、经修饰的T7噬菌体DNA聚合酶19
五、TaqDNA聚合酶及AmpliTaqTMDNA聚合酶20
六、反转录酶20
第四节DNA修饰酶21
一、末端脱氧核苷酸转移酶21
二、碱性磷酸酶21
三、T4噬菌体多核苷酸激酶22
第五节单链核酸内切酶22
一、S1核酸酶22
二、Bal31核酸酶23
第六节核酸外切酶24
一、核酸外切酶Ⅶ24
二、核酸外切酶Ⅲ24
三、λ核酸外切酶25
第三章 基因克隆技术制药常用质粒载体26
第四章 基因克隆技术制药常用噬菌体载体43
第五章 基因工程药物目的基因制取65
第六章 目的基因与克隆载体的体外重组83
第七章 重组克隆载体引入受体细胞95
第八章 目的重组克隆的筛选、鉴定与分析104
第九章 目的基因在宿主细胞中的表达127
第十章 基因克隆技术制药概述151
下篇 应用篇
第十一章 生物药物基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达163
第十二章 生物药物基因的克隆及其在酵母菌中的表达188
第十三章 生物药物基因的克隆及其在昆虫中的表达194
第十四章 生物药物基因的克隆及其在动物细胞中的表达200
第十五章 基因工程菌和工程细胞的培养与发酵215
第十六章 基因工程药物的分离纯化229
第十七章 基因工程药物的分析与检验241
附录1 干扰素效价测定(细胞病变抑制法)263
附录2 重组人白细胞介素2效价测定(CTLL2依赖细胞株/MTT比色法）265
附录3 EPO体内活性测定(网织红细胞法)266
附录4 EPO纯度测定(HPLCSEC法)267
附录5 CHO细胞蛋白残留量测定(ELISA法)268
附录6 rhGCSF效价测定(NFS60依赖株/MTT比色法)269
主要参考文献270