神经药理学研究技术与方法

第1章 神经细胞培养与检测
第1节 概述
第2节 培养神经细胞的设备与材料
一、 实验室
二、 实验设备
三、 实验材料
第3节 神经细胞培养类型
一、器官培养
二、组织块培养
三、细胞分离培养
第4节 神经细胞原代分散培养
四、 神经细胞培养的准备
五、 神经细胞的分散培养（方案之一）
六、 神经细胞的分散培养（方案之二）
七、 分离细胞悬液的接种密度和活性评估
八、 培养神经细胞的形态学观察
九、 培养神经细胞的鉴别与定性
十、 神经胶质细胞培养
第5节 神经细胞株培养
一、 细胞株培养
二、 神经胶质细胞及细胞株的再培养与保存
第6节 培养神经细胞的病理模型
一、低糖低氧模型
二、过氧化氢（H2O2）损伤模型
三、高钾毒性模型
四、谷氨酸毒性模型
五、NO毒性模型
六、Aβ毒性模型
第7节 培养神经细胞的测定指标与方法
一、形态学观察
二、细胞活力测定
三、蛋白总量分析
四、DNA损伤检测
五、羰基化蛋白检测
六、电生理特性测定
七、培养神经细胞的受体反应
八、培养神经细胞的突触反应
九、培养神经细胞电特性测定方法和离子通道的膜片钳测定方法
十、免疫组化研究
第8节 细胞悬液标本蛋白质定量方法
一、凯氏定氮法
二、双缩脲法
三、Folin (福林)-酚试剂法
四、紫外分光光度法
五、考马斯亮蓝G-250染色法
六、BCA法
第9节 培养神经细胞的药理学研究方法评价
第2章 神经细胞凋亡
第1节 概述
第2节 神经细胞凋亡模型制作方法
一、 大脑皮层或海马神经元的原代培养
二、 小脑颗粒神经细胞的原代培养
三、 神经细胞凋亡模型
第3节 抗神经细胞凋亡药理学研究指标与方法
一、细胞形态学研究方法
二、生化学研究方法
三、分子生物学研究方法
四、末端标记法
第4节 抗神经细胞凋亡研究方法评价
第3章 神经递质、调质和神经肽
第1节 概述
第2节 神经标本制备
一、 试剂与设备
二、脑匀浆（homogenate）制备
三、突触小体（synaptosome）制备
四、粗制线粒体的制备
五、离体脑片制备
第3节 单胺类递质摄取的测定
第4节 离体脑组织单胺类神经递质及其代谢产物测定法
一、HPLC-EC检测法
二、气相色谱测定法
三、荧光分光光度测定法
四、同位素测定法
第5节 脑内组胺测定方法
一、生物检定法
二、荧光测定法
第6节 松果体褪黑素的高效液相测定
第7节 脑内氨基酸的测定方法
一、自动分析仪测定法
二、高效液相色谱测定法
三、荧光法测定脑细胞谷氨酸释放
四、血、脑色氨酸和酪氨酸荧光微量测定法
第8节 在体脑组织递质释放研究方法
一、推挽灌流法
二、脑内微透析法
第9节 放射受体分析法测定配体和肽类物质
第10节 脑内啡肽的测定方法
一、放射受体分析法
二、放射免疫分析法
第11节 P物质放射免疫测定方法
第12节 乙酰胆碱的检测
一、HPLG-RE-ECD法测定乙酰胆碱
二、乙酰胆碱的放射免疫测定法
三、全血胆碱酯酶活性测定
第4章 神经细胞内钙及钙结合蛋白
第1节 细胞内游离钙的测定
一、钙的生理及病理学意义
二、细胞内Ca2+的调节及钙通道类型
三、实验标本制备
四、细胞内游离Ca2+ 测定
第2节 细胞内钙释放
一、放射性标记法测定内钙释放
二、荧光分光光度法测定三磷酸肌醇刺激的内钙释放
第3节 钙结合蛋白
一、 钙调素
二、钙结合蛋白
三、钙调素结合蛋白
第4节 整体动物脑细胞外钾、钙离子水平测定（连晓媛）
一、双管离子选择电极制备
二、标准曲线制备
三、细胞外K＋或Ca2＋水平测定
四、应用实例-胶质细胞毒素对脑细胞外钾离子水平的影响
第5章 脑能量代谢与线粒体功能
第1节 概述
第2节 能量代谢研究方法
一、脑线粒体提取制备
二、线粒体呼吸功能测定
三、线粒体呼吸链酶复合体活性测定
四、ATP酶活性测定
五、抗氧化酶（SOD）活性测定
六、线粒体膜电位（ΔΨ）的测定
七、线粒体内游离钙测定
八、线粒体细胞色素C含量测定
九、膜流动性测定
十、线粒体鉴定
十一、线粒体肿胀测定
十二、线粒体活性成分测定（GSH，GSH-PX，MDA，ATP）
十三、刃天青法检测线粒体功能
第6章 神经细胞氧化性应激
第1节 概述
第2节 脂质过氧化产物测定
一、过氧化脂质（LPO）测定
二、脑细胞膜流动性检测
三、脂褐素测定
四、脂质过氧化氢含量测定
五、谷胱甘肽 (GSH) 测定
第3节 过氧化酶活性测定
一、超氧化物歧化酶 (SOD) 活性测定
二、过氧化氢酶 (CAT) 活性测定
三、过氧化物酶 ( POD) 活性测定
四、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定
五、单胺氧化酶活性测定
第4节 自由基浓度测定
一、DMSO氧化生成甲醛分光光度法
二、化学发光法
三、高效液相（HPLC）电化学检测法
四、顺磁共振法
五、自由基捕捉技术
第7章 神经应激与一氧化氮及一氧化碳
第1节 一氧化氮及其合成酶
一、 概述
二、电化学方法
二、 Griess反应法
三、 正铁血红蛋白分光光度法
五、鲁米诺化学发光法
六、荧光检测法
七、高效液相色谱法
八、高压液相荧光检测法测定神经元突触体胞液NOS活性
九、电子顺磁共振
十、NADPH-黄递酶（NADPH-d）组化染色法
十一、免疫组织（细胞）化学法
十二、原位杂交等分子生物学技术
十三、NO间接测定法-L-Arg转化实验
十四、cGMP测定法
十五、生物学方法
十六、细胞内NO浓度（[NO]i）测定
十七、NO3-（过氧亚硝酸根离子）测定
十八、NO毒性实验
第2节 一氧化碳及其合成酶
一、 概述
二、CO的生物来源和代谢过程
三、调控CO产生的方法
四、CO的测定方法
五、血红素氧合酶的测定技术
六、CO的神经作用观察方法
第8章 神经营养因子
第1节 概述
第2节 神经营养物质及其受体
一、神经营养物质
二、神经营养物质受体
三、神经营养物质的生理作用
四、神经营养物质和突触可塑性
五、神经营养物质和Trk受体基因敲除小鼠
第3节 神经生长因子的纯化
一、鼠的NGF
二、人(-NGF的纯化
第4节 体外神经营养因子的活性测定
一、神经突起向外生长的测定
二、体外培养细胞中神经营养因子活性的测定
第5节 神经营养物质的提取和定量
一、神经营养物质的提取
二、神经营养物质的酶联免疫分析
第6节 神经营养物质mRNA的定量
一、实验前准备
二、实验步骤
三、注意事项
第7节 免疫组织化学法检测神经营养物质在中枢神经系统的表达
一、实验前准备
二、实验过程
三、注意事项
第9章 神经干细胞
第1节 概述
第2节 相关概念
第3节 神经干细胞研究方法学
一、神经干细胞培养
二、神经干细胞的冷冻保藏与复苏
三、神经干细胞的免疫组织化学鉴定法
第10章 神经细胞离子通道电生理学
第1节 玻璃微电极细胞内记录技术
一、细胞内记录技术基本原理
二、活体细胞内记录及染色技术
三、细胞内记录技术的潜在误差及局限性
第2节 神经细胞膜片钳技术原理及方法
一、膜片钳技术原理
二、离子通道电流的记录方法
三、神经细胞离子通道的研究
四、电流和电压的命名规则
第3节 脑片膜片钳研究技术与方法
一、脑片膜片钳技术简介
二、脑片膜片钳技术方法
三、脑片膜片钳技术的优点
四、海马脑片盲法膜片钳技术
第11章 神经系统受体
第1节 概述
第2节 受体结合的研究方案
第3节 膜片放射配体受体结合实验
一、放射配体的选择
二、组织的选择和制备
三、缓冲液和佐剂
四、非特异性结合的测定
五、孵育条件
六、放射配体-受体复合体与游离放射配体的分离
七、饱和动力学研究
八、竞争性结合数据的计算
九、ex vivo和在体结合技术
第4节 脑片受体结合的放射自显影方法与技术
一、冰冻脑片的制备
二、放射性配基结合
三、放射自显影
四、显微测密度术定量分析图像
第5节 神经受体实验方法与技术
一、肾上腺素受体
二、多巴胺受体
三、M胆碱能受体
四、5-HT受体
五、组织胺H1受体
六、吗啡受体
七、苯二氮zaozi001受体
八、γ-氨基丁酸(GABA) 受体
九、氯离子通道开放实验
十、l,4-双氢吡啶（DHP）钙通道受体
第6节 神经受体药理学研究方法评价
第12章 神经细胞内信号传导
第1节 概述
第2节 G蛋白的分离纯化及测定
一、G蛋白提取及纯化
二、G蛋白活性检测
第3节 环核苷酸测定
一、cAMP荧光测定法
二、cAMP蛋白质竞争结合法
三、cGMP放射免疫测定
第4节 肌醇磷脂测定
一、[3H]肌醇标记测定肌醇磷脂及PLC活性
二、特异受体结合法测定1,4,5-IP3
第5节 酪氨酸激酶测定-活细胞及细胞膜样本32P标记
第6节 蛋白激酶C的纯化和活性测定
一、蛋白激酶C的提取和纯化
二、蛋白激酶C活性的测定
第7节 细胞间隙连接结构及功能
一、间隙连接蛋白的分离与纯化
二、电镜观察细胞间隙连接通道的方法
三、免疫荧光染色技术
四、染料或同位素示踪分子法
五、代谢试验
第13章 免疫学方法在神经药理学研究中的应用
第1节　概述
第2节　免疫组织（细胞）化学法
一、基本原理
二、标记（染色）方法
三、秋水仙素对免疫组化染色结果的影响
四、酶消化
四、 抗体稀释度和效价
五、 免疫组化的非特异性染色和交叉反应
六、 免疫组织化学染色的对照实验
七、 免疫组化方法的基本过程
八、 免疫组化技术在神经药理学研究中的应用实例
九、 免疫组化双重染色技术
十、 受体定位技术
十一、免疫电子显微镜技术
第3节 酶联免疫测定技术
一、基本原理
二、在固相包被免疫反应物
三、酶标记抗体的制备
四、 ELISA测定的一般方法
五、 应用实例
第4节 免疫沉淀技术
一、靶蛋白的放射性标记
二、裂解细胞
三、抗原-抗体复合物的形成及收集
第5节 放射免疫分析法
一、 基本原理
二、抗血清的制备
三、抗原的标记
四、操作步骤
第6节 免疫印迹技术
一、基本原理
二、组织和细胞的裂解
三、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
四、蛋白质的电转移
五、固定于膜上的蛋白质染色
六、封闭硝酸纤维素膜
七、抗体与被测蛋白结合
八、酶联抗体显色
十一、 应用实例
第14章 脑神经通路损毁模型及中枢给药方法
第1节 中枢神经通路损毁方法
一、电解损毁法
二、化学损毁法
三、手术损毁法
四、单个神经元的杀伤技术
五、外周神经的损伤
第2节 中枢给药方法
一、小鼠脑室给药法
二、大鼠侧脑室给药法
三、大鼠脑内神经核团给药法
四、脑室灌流法
五、一种体内持续给药方法-微量透析泵
第15章 抗脑缺血药理学
第１节 概述
第２节　脑缺血动物实验模型
一、全脑缺血动物模型
二、局灶性脑缺血模型
三、缺血性脑损伤的评价方法
四、动物模型中缺血性脑损伤的影响因素
五、脑缺血体外模型
第３节 缺血性神经细胞损伤的机制分析
一、线粒体功能的评价
二、自由基及氧化损伤
三、半胱氨酸蛋白酶活性分析
四、炎性细胞因子测定
第16章 学习、记忆的行为学研究方法
第1节 概述
第2节 条件反射法
一、跳台法
二、避暗法
三、穿梭箱
四、迷津
五、八臂迷宫法
六、记忆障碍动物模型
七、操作式条件反射
八、用于观察认知功能改善的老年痴呆或记忆障碍模型
第3节 海马LTP的记录方法
第4节 LTP结合行为学实验评价促智药物
第17章 突触可塑性电生理学
第1节 概述
第2节 突触可塑性的分类
一、双脉冲可塑性
二、强直后增强
三、LTP
四、LTD
五、突触超可塑性
第3节 突触可塑性实验的相关术语和参数
一、诱发动作电位
二、测量峰点非固定波动分析
三、海马回路
四、基础水平线
五、输入/输出曲线
六、诱导突触可塑性的参数
七、计算机数据采集分析系统
第4节 大鼠在体脑内记录突触可塑性的方法
一、仪器设备
二、实验步骤
三、注意事项
第5节 脑片上记录LTP的方法
一、仪器设备
二、实验步骤
三、注意事项
四、常用网站
第18章 老年痴呆症（AD）实验模型及抗AD研究
第1节 概述
第2节 AD动物模型
第3节 APP转基因模型
一、影响APP转基因鼠模型的相关因素
二、APP转基因鼠的神经病变特征
第4节 体外培养神经细胞A(损伤模型
一、神经细胞培养
二、Aβ毒性模型建立
第5节 (-淀粉样蛋白刚果红染色
一、染色原理
二、标本制备
三、实验材料与试剂
四、染色过程
五、结果
第6节 损毁中枢胆碱能神经元的AD动物模型
一、基本原理
二、操作步骤
三、观测指标
四、注意事项
五、方法评价
第7节 AD药物治疗的途径和研究展望
第19章 帕金森病（PD）实验模型及抗PD研究
第1节 概述
第2节 帕金森病动物模型
一、MPTP模型
二、6-羟基多巴胺（6-OHDA）模型
三、高铁模型
四、机械损伤模型
五、利血平模型
六、L-DOPA 诱导的运动障碍动物模型
七、槟榔碱致小鼠震颤模型
八、氧化震颤素致小鼠震颤模型
九、毒扁豆碱致大鼠震颤模型
十、氟哌啶醇致小鼠僵住症模型
十一、病毒感染模型
十二、方法评价
第3节 帕金森病体外细胞模型
一、细胞转染的PD体外模型
二、药物毒性作用诱导的PD体外模型
第4节 帕金森病动物模型的检测方法
一、动物旋转实验
二、脑中单胺氧化酶（MAO-B）活性测定
三、脑中乙酰胆碱酯酶（Ach E）活性测定
四、脑区DA神经元定性-TH染色
五、DA能神经递质释放的测定-快速周期伏安法
六、脑内多巴胺及其代谢产物含量测定-高效液相色谱法
七、在体测定脑内DA含量变化-微透析法
八、DA受体测定
第5节 帕金森病的神经干细胞（NSC）移植疗法
一、NSC的来源
二、NSC的分离、培养与鉴别
三、NSC的增殖和分化
四、NSC移植
第20章 抗焦虑药理学
第1节 概述
第2节 可供选择的模型
一、非条件反射焦虑模型
二、条件反射焦虑模型
第21章 抗抑郁药理学
第1节 基本原则
第2节 抑郁动物模型
一、应激模型
二、脑损伤模型-大鼠嗅球切除模型
三、操作行为模型-大鼠72秒低频差式强化程序法
四、药物相互作用模型
五、遗传型抑郁动物模型
第22章 抗癫痫、抗惊厥药理学
第1节 概述
第2节 体外实验方法
一、[3H]-GABA受体结合实验
二、GABAA受体结合实验
三、GABAB 受体结合实验
四、GABA摄取和释放实验
五、[3H]CPP谷氨酸受体结合实验
六、NMDA受体复合物：[3H] TCP结合实验
七、[35S]-TBPS与大鼠皮层匀浆及切片结合实验
八、[3H]甘氨酸与大鼠大脑皮层结合试验
九、[3H]士的宁敏感的甘氨酸受体
十、体外海马切片
第3节 在体实验方法
一、急性实验性惊厥模型
二、慢性实验性癫痫模型
三、原发性实验性癫痫模型
第23章 镇静催眠药理学
第1节 镇静作用
一、间断性行为实验观察方法
二、开阔法实验
三、孔板实验
四、联合开阔法实验
五、遥测分析大鼠大脑EEG
第2节 催眠作用
一、体外实验
二、体内实验
第24章 镇痛药理学
第1节 概述
第2节 痛觉模型及测定
一、整体动物模型
二、受体水平评价阿片类化合物活性
三、离体器官实验
第3节 痛觉电生理学
一、痛觉电生理研究的电刺激法
二、生物电信号记录
三、电压钳和膜片钳技术
四、脑电图及肌电图的方法
第4节 痛觉递质与受体
一、痛觉递质的测定
二、痛觉相关受体的研究
第25章 药物依赖性
第1节 概述
第2节 镇静催眠依赖性实验
一、小鼠实验方法
二、大鼠实验方法
三、恒河猴实验方法
第3节 阿片类成瘾药物依赖性实验
一、小鼠试验模型
二、大鼠试验模型
三、恒河猴试验模型
四、离体回肠纵肌试验模型
第26章 神经药理学研究常用药品与试剂介绍
第1节 细胞凋亡
一、概述
二、凋亡研究用抗体
三、凋亡检测试剂盒
四、凋亡检测试剂
五、细胞凋亡酶类和蛋白质
六、 Caspase抑制剂
七、 Caspase底物
八、 PARP调节剂
第2节 神经传递
一、神经科学研究用抗体
二、神经蛋白质
三、神经递质代谢
四、神经肽类
五、神经递质
六、药理学制剂
第3节 钙信号系统
一、钙通道调节剂
二、细胞内钙调节剂
三、钙通道抗体
四、钙调素和其它钙结合蛋白
五、钙相关蛋白抗体
六、钙调素拮抗剂
七、钙探针
八、钙络合剂
第4节 一氧化氮与细胞应激
一、细胞应激
二、氧化氮代谢
三、蛋白小体
第5节 细胞因子、生长因子与激素
一、细胞因子、生长因子和激素概述
二、神经生长因子概述
三、神经生长因子试剂
四、神经生长因子抗体
第6节 单价离子通道
一、单价离子通道概述
二、钾通道概述
三、钾通道试剂
四、钠通道试剂
五、各种离子泵抑制剂
六、氯通道
七、离子通道抗体
八、离子载体
九、离子探针
第7节 受体
一、细胞因子、生长因子和激素受体
二、细胞因子、生长因子和激素受体抗体
三、神经递质受体
四、神经递质受体抗体
第8节 G蛋白和环核苷酸
一、G蛋白功能
二、环核苷酸代谢
第9节 细胞信号传导中的脂质
一、二酰基甘油
二、神经节苷脂
三、肌醇磷酸
四、磷脂
五、磷脂代谢
六、神经鞘脂类
七、鞘脂类代谢
八、其它生物活性脂质
九、脂质信号传导抗体
第10节 信号传导研究用品
一、分析性细胞学试剂盒及供应品
二、细胞生长和活力测试盒
三、连接物试剂盒
四、神经元染料和示踪剂
五、细胞溶解酶
六、洗涤剂
七、蛋白酶抑制剂
八、结合型试剂盒
九、缓冲液与试剂
第27章 图像可视化技术在神经药理学研究中的应用
第1节 低分子荧光探针在观察神经功能活动的可视化应用
一、荧光的原理和荧光探针
二、荧光的检测装置
三、荧光可视化法在神经药理学的应用
第2节 荧光蛋白的特性及其在生命科学领域的应用
一、荧光蛋白的发现经过及其应用
二、荧光蛋白的特殊性质
三、GFP嵌合蛋白（Chimera protein）的设计
第3节 荧光蛋白可视化技术在神经药理学研究中的应用
一、利用荧光蛋白可视化技术对神经细胞内信号传导通路的解析
二、利用荧光蛋白可视化技术对神经细胞内重要蛋白的观察解析
三、细胞内功能蛋白的存在部位和动态的解析
附 录
附录1 神经药理学研究参考书简介
附录2 神经科学及药理学期刊简况
索 引
中文索引
英文索引