第1章 重组蛋白分离与分析概论1 11 重组蛋白质概论1 12 重组蛋白质的设计及纯化技巧2 13 纯化目标5 131 产品的纯度和安全性5 132 终产物成本5 14 纯化策略6 15 纯化过程的放大7 16 对纯化的综合评价8 17 合理设计纯化工艺8 主要参考文献11 第2章 重组蛋白纯化的一般工艺及方法14 21 引言14 22 用做纯化的主要蛋白质性质14 221 蛋白质大小15 222 蛋白质形状15 223 蛋白质荷电性15 224 蛋白质等电点16 225 蛋白质疏水性16 226 蛋白质溶解度16 227 蛋白质密度16 228 蛋白质与配体结合能力16 229 蛋白质与金属螯合能力16 2210 蛋白质的某些特殊性质17 23 纯化分离技术18 231 发酵液的预处理18 232 细胞分离技术20 233 细胞破碎技术24 234 生物物质的分离纯化技术24 24 纯化方案中纯化顺序的选择76 25 固定相的选择77 26 方案的有效性分析78 主要参考文献79 第3章 细胞破碎的物理及化学方法81 31 前言81 32 破碎率的评价81 33 破碎方法82 331 球磨匀浆法83 332 转子-定子式匀浆机匀浆87 333 高压匀浆机匀浆90 334 超声波破碎94 335 其他物理方法95 336 细胞自溶98 337 酶解法101 338 干燥法102 339 其他化学溶剂法103 3310 细胞渗透法103 3311 通过细胞自身调控体系进行细胞的破碎104 34 总结104 主要参考文献106 第4章 纯化过程中如何防止蛋白水解108 41 天然及变性蛋白的水解108 411 蛋白酶的生化作用108 412 蛋白酶的种类和蛋白酶的作用机理109 413 蛋白酶的特异性及对降解底物的敏感性110 42 用作宿主细胞的真核、原核生物体内的蛋白酶111 421 大肠杆菌 (Ecoli）内的蛋白酶111 422 枯草杆菌 (Bacillus subtilis）产生的蛋白酶112 423 酵母中的蛋白酶113 424 哺乳动物细胞内的蛋白酶115 43 蛋白酶的鉴定116 44 防止重组蛋白水解的策略117 441 基因调控法118 442 去除蛋白酶的策略121 443 抑制蛋白酶的策略122 主要参考文献125 第5章 从重组蛋白质中除去N末端甲硫氨酸的方法127 51 引言127 511 蛋白质转译后的修饰及鉴定分析127 512 甲硫氨酸氨基肽酶的特性131 513 胞质间重组蛋白的加工131 514 与多余甲硫氨酸相关的非均匀性和免疫原性132 52 去除末端甲硫氨酸的方法133 521 体内去除末端甲硫氨酸的方法133 522 去除末端甲硫氨酸的体外方法135 主要参考文献137 第6章 药用蛋白质的纯化141 61 引言141 62 蛋白质纯化过程中的质量控制142 621 蛋白质生物功效142 622 蛋白质结构143 623 蛋白质纯度的测定143 624 终产品中痕量杂质的分析143 63 蛋白质纯化准则143 631 初始原料物质的浓度和杂质性质144 632 非蛋白杂质的去除145 633 DNA的去除145 634 热源的去除147 635 病毒的去除149 636 外源蛋白的去除150 64 方案的有效性151 65 结论152 主要参考文献153 第7章 利用工程修饰改进重组蛋白的纯化分离157 71 引言157 72 引入切割位点的重组工程蛋白158 73 促进活性蛋白分离的工程技术159 731 形成包涵体以稳定蛋白质160 732 基团修饰以利天然活性蛋白质生产162 74 简化纯化工艺的蛋白质工程163 741 改进色谱性能的蛋白质工程164 742 构建工程位点使蛋白质具有免疫亲和性能164 743 构建工程位点使蛋白质具有离子交换吸附性能166 744 构建工程位点使蛋白质具有金属亲和吸附性能168 745 低成本纯化蛋白工程171 746 改进分析方法的蛋白质工程171 75 结论172 主要参考文献173 第8章 大肠杆菌表达的重组蛋白的分离纯化175 81 引言175 82 大肠杆菌表达的分泌型重组蛋白的纯化分离178 821 纯化方法179 822 实例180 823 分泌型重组蛋白的纯化分离总结199 83 大肠杆菌表达的包涵体蛋白的纯化分离200 831 确定包涵体量201 832 重组蛋白稳定性检测204 833 纯化方案206 834 包涵体的组成分析210 835 包涵体的结构214 836 影响包涵体形成的因素214 837 包涵体蛋白纯化实例216 838 包涵体蛋白纯化总结221 主要参考文献221 第9章 酵母表达的重组蛋白的分离纯化225 91 引论225 92 酿酒酵母或面包酵母表达的重组蛋白的分离纯化227 921 酿酒酵母或面包酵母表达的胞内蛋白质的分离纯化228 922 酿酒酵母或面包酵母分泌表达的蛋白质的分离纯化232 923 结论234 924 酿酒酵母或面包酵母表达的重组蛋白的研究展望235 93 Pichia pastoris生产的重组蛋白的分离纯化235 931 背景235 932 Pichia pastoris表达体系的发展236 933 Ppastoris表达的胞内外源蛋白239 934 Pichia pastoris分泌的外源蛋白的分离纯化242 935 讨论248 主要参考文献249 第10章 单克隆抗体的纯化252 101 引言252 102 单克隆抗体制备过程253 103 抗体的物理特征257 104 单克隆抗体纯化工艺258 1041 澄清258 1042 沉淀260 1043 分离260 1044 非蛋白杂质的去除271 附录 鼠源性病毒检测273 主要参考文献274
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