基因工程实验指导

实验计划表
导论
1 基因文库的构建
l—l 染色体DNA的提取
1—2 总RNA和mRNA的提取
1—3 噬菌体DNA的提取
l一4 染色体DNA的部分消化
1—5 基因组文库的构建
1—6 cDNA合成
1—7 cDNA文库的构建
2 目的基因的获得
2—1 PCR扩增及RT—PCR
2—2 核酸电泳
2—3 核酸探针的标记及检测
2—4 核酸探针筛选基因文库
3 载体质粒的制备
3—1 质粒DNA的提取与纯化
3—2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定
4 扩增质粒的构建
4—1 限制性内切酶的酶切反应
4—2 凝胶电泳法进行DNA的分离、提纯
4—3 DNA片段的体外连接
5 重组DNA导入宿主细胞
5—1 感受态细胞的制备
5—2 重组质粒的转化
6 重组子的筛选与鉴定
6—1 阳性克隆的筛选
6—2 测序与序列同源性分析
6—3 Southern印迹
7 表达质粒的构建与诱导表达
7—1 表达质粒的构建
7—2 Northern印迹
7—3 外源基因的诱导表达
7—4 SDS—PAGE
7—5 Western印迹
7—6 酶联免疫吸附测定(ELISA)
7—7 蛋白质生物功能测定法
8 工程菌的培养与目标产物分离
8—1 发酵条件的优化
8—2 诱导表达蛋白质的分离沉淀
8—3 凝胶过滤层析
8—4 离子交换层析
8—5 蛋白质浓度的测定
8—6 酶活性的测定
8—7 分离纯化蛋白的收率计算与保存
参考文献
附录1 简写
附录2 实验注意事项
附录3 如何撰写实验报告
附录4 常用的碱基、氨基酸符号及缓冲液
附录5 大肠杆菌基因型
附录6 培养基与试剂的配制
附录7 实验仪器