遗传工程概论（第2版）

第一章 引言
一、遗传工程的概念
二、遗传工程的发展概况
三、遗传工程所需的微生物学原理
（一）大肠杆菌的一般特性
（二）抗生素抗性
（三）细菌细胞的生长
第二章 遗传工程的载体
一、质粒载体
（一）质粒的复制
1.质粒的复制起始和控制
2.质粒的不相容性
（二）质粒的改造
（三）目前常用的质粒载体
1.带有多克隆位点的质粒
2.带有噬菌体启动子的质粒
3.表达质粒
二、单链噬菌体克隆载体
（一）M13噬菌体
（二）α互补
（三）M13及其寄主的改造
（四）噬菌粒
三、双链噬菌体克隆载体
（一）入噬菌体的基因组结构与侵染
1.λ噬菌体的生活周期
2.λ噬菌体的基因组结构
3.λ噬菌体的侵染
（二）λ噬菌体载体的构建
1.生物学制约
2.载体的通用性
3.体外包装
四、粘粒载体
第三章 DNA的提取
一、原核生物染色体DNA的提取
二、原核生物染色体外DNA的分离
三、质粒DNA的快速提取
四、真核生物染色体DNA的提取
五、DNA浓度和纯度的光学分析
第四章 遗传工程的酶学基础
一、限制性内切酶
（一）寄主的限制和修饰
（二）限制性内切酶的类别
1.第一类限制性内切酶
2.第二类限制性内切酶
3.第三类限制性内切酶
（三）限制性内切酶的纯化
（四）限制性内切酶反应的终止
二、DNA聚合酶
（一）E.coliDNA聚合酶I
（二）E.coliDNA聚合酶I的Klenow片段
（三）T4DNA聚合酶
（四）天然的T7DNA聚合酶
（五）修饰的T7DNA聚合酶
（六）TaqDNA聚合酶和反转录酶
三、依赖于DNA的RNA聚合酶
四、DNA及RNA的修饰酶
（一）末端脱氧核苷酸转移酶
（——）T4多核苷酸激酶
（三）碱性磷酸酶
五、核酸酶
（一）DNA酶I
（二）Bal31核酸酶
（三）S1核酸酶
（四）外切核酸酶III
（五）核糖核酸酶H
第五章 凝胶电泳和杂交分析
一、凝胶电泳
（一）基本原理
（二）DNA的可见性
（三）电泳图谱
（四）凝胶系统
（五）实验条件对凝胶电泳的影响
（六）指示染料和加样缓冲液
（七）DNA分子大小的确定
（八）DNA的回收
二、杂交分析
（一）Southern吸印和杂交分析
（二）Northern吸印和杂交分析
（三）Western印迹检测技术
（四）DNA的斑点杂交
（五）探针的制备
1．缺口平移法
2．随机引物法
3．液体闪烁计数
4．非放射性探针
（六）DNA芯片技术
第六章 DNA的连接
一、大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶
二、DNA片段在体外的连接
（一）粘性末端的连接
（二）平齐末端的连接
（三）非互补末端的连接
（四）接头的使用
1．1inker
2．adaptor
三、影响连接反应的因素
四、提高连接反应效率的两项措施
第七章 细菌转化
一、细菌转化的原理
二、细菌转化的方法
（一）简便、快速的感受态制备和转化方法
（二）标准的高效转化法
（三）“超级感受态”细胞的制备和转化
（四）菌落转化法
（五）X1776的转化方法
（六）电击转化
三、转化的评估指标
（一）转化效率（转化频率）
（二）感受态细胞的比例
第八章 理想克隆的鉴定
一、表现型的鉴定
（一）利用抗生素进行筛选
（二）利用显色进行筛选
二、限制性作图分析
（一）限制性作图
（二）限制性分析与Southern杂交相结合
三、菌落和噬菌斑的原位杂交
（一）菌落原位杂交
（二）噬菌斑原位杂交
（三）原位杂交的优越性和进一步的鉴定
四、用PCR扩增目的片段
五、免疫检测法
（一）用免疫检测法筛选表达文库的过程
1．筛选噬菌斑构成的表达文库
2．筛选菌落构成的表达文库
（二）关于免疫检测法的几个问题
1．多克隆抗体和单克隆抗体
2．多克隆抗体的来源
3．第一抗体的检测
4．第二抗体的来源
5．对酶促发色法和放射化学法进行比较
6．对碱性磷酸酶与抗体的偶联物和辣根过氧化物酶与抗体的偶联物进行比较
7．诱导外源蛋白表达的时间
六、酵母人工染色体文库的筛选
（一）YAC基因组文库的保存
（二）YAC基因组文库的筛选方法
（三）构建、贮存和筛选的分工
（四）筛选YAC文库的流程
第九章 克隆基因在大肠杆菌细胞中的表达
一、外源基因在大肠杆菌细胞中表达的原理和技术
（一）表达系统的选择
1．蛋白质的大小
2．蛋白质的活性
3．蛋白质的需要量
（二）启动子的选择
1．乳糖操纵子的启动子（1acUV5启动子）
2．色氨酸启动子（trp启动子）
3．乳糖操纵子和色氨酸操纵子的复合启动子（tac或trc启动子）
4．噬菌体T7启动子
（三）融合蛋白质的表达
1．融合蛋白质表达的特点和载体
……
第十章 cDNA文库技术
第十一章 基因组文库的构建
第十二章 DNA的序列分析
第十三章 聚合酶链式反应
第十四章 克隆化DNA的定点诱变
第十五章 图位克隆法
第十六章 酿酒酵母的遗传工程
第十七章 植物基因工程
第十八章 哺乳动物的基因工程
第十九章 用重组DNA技术生产药物