小说开始于肯塔基州,农场主亚瑟·谢尔比面临着因欠债将失去其田地的困境。尽管他与妻子谢尔比太太对待他们的奴隶都十分友善,但谢尔比还是决定将几名奴隶卖给奴隶贩子来筹集他急需的资金。被卖掉的奴隶有两名:其一为汤姆叔叔,其二为谢尔比太太的女仆伊莉莎的儿子哈里。无奈之下,伊莉莎带着儿子选择逃亡。途中,她偶然遇见了比她先一步逃走的丈夫乔治·哈里斯,于是,他们历经了千难万险成功逃往加拿大。而汤姆叔叔则被奴隶贩子带走,在被贩卖途中被新奥尔良年轻的庄园主辛克莱尔买了回去。在汤姆和辛克莱尔及其女儿一同生活了两年后,伊娃得了重病。在她临死之前,在一场梦境中梦见了天堂,她把这场梦告诉了她身边的人。由于伊娃的死与她的梦境,辛克莱尔决定将给汤姆以自由。然而,在辛克莱尔履行他的诺言之前,却因为一场意外而亡。汤姆被辛克莱尔的妻子再度卖给了一名凶恶的农场主西芒·雷格里。在那里,他受到百般折磨,最终克死他乡。在他临死前,以前的少主人乔治·谢尔比出现了,他要买回汤姆的自由,但已经太迟了。