医学细胞分子生物学实验（第3版）

目录
第一篇 基础实验
第一章 医学细胞生物学基本实验 1
第一节 细胞的显微结构 1
实验一 细胞的一般形态结构观察 1
实验二 细胞的显微测量技术 6
第二节 细胞生理活动 8
实验三 胞质环流 8
实验四 细胞吞噬 9
实验五 细胞活性鉴定 11
实验六 细胞融合 12
第三节 细胞化学成分的显示 14
实验七 普通细胞化学 15
实验八 核酸细胞化学 21
实验九 酶细胞化学 25
实验十 荧光细胞化学与免疫荧光细胞化学 28
第四节 细胞增殖 34
实验十一 无丝分裂 34
实验十二 有丝分裂 35
实验十三 减数分裂 39
实验十四 X染色质标本制备与观察 42
实验十五 早熟染色体凝集的诱导和观察 43
第五节 细胞培养 46
实验十六 原代细胞培养 47
实验十七 细胞传代培养 49
实验十八 体外培养细胞的观察方法 53
第二章 医学生物化学基本实验 59
第一节 蛋白定量分析实验 59
实验一 双缩脲法测定蛋白质含量 59
实验二 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 60
实验三 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 61
实验四 紫外分光光度法测定蛋白质含量 62
第二节 层析分离纯化实验 64
实验五 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定 64
实验六 葡聚糖凝胶分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶混合液 67
实验七 离子交换层析分离混合氨基酸 68
第三节 电泳分析实验 69
实验八 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 69
实验九 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 71
实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LDH同工酶 72
实验十一 SDS-PAGE测定蛋白质分子量 75
实验十二 等电聚焦法测定蛋白质等电点 77
第四节 酶学实验 79
实验十三 pH对酶促反应速度的影响 79
实验十四 温度对酶促反应速度的影响 82
实验十五 底物浓度对酶促反应速度的影响 83
实验十六 抑制剂对酶促反应速度的影响 85
实验十七 酶的提取及比活性测定 87
第五节 物质代谢实验 92
实验十八 胰岛素对血糖含量的影响 92
实验十九 邻甲苯胺法测血糖含量 92
实验二十 糖酵解中间产物的鉴定 93
实验二十一 血清中谷丙转氨酶活性的测定 95
实验二十二 血清脂类含量分析 97
第三章 医学分子生物学基本实验 100
第一节 基因克隆实验 100
实验一 质粒DNA的限制性酶切反应 101
实验二 琼脂糖凝胶电泳分离鉴定酶切的线性DNA片段 104
实验三 DNA酶切片段的回收 107
实验四 DNA片段的体外连接 109
实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备 111
实验六 重组DNA的转化及阳性克隆的初步筛选 112
实验七 阳性重组子的鉴定 114
实验八 碱裂解法质粒DNA的小量制备 115
实验九 质粒DNA浓度和纯度的测定 117
第二节 外源基因GFP在原核细胞中的诱导表达和纯化 117
实验十 外源基因在大肠杆菌的诱导表达和提取 118
实验十一 亲和层析法纯化重组蛋白 119
实验十二 SDS-PAGE鉴定重组蛋白质 119
第三节 PCR技术 121
实验十三 PCR扩增目的基因 123
实验十四 总RNA提取及RT-PCR扩增目的基因 124
实验十五 实时定量PCR分析真核基因的表达 128
第四章 医学遗传学基本实验 130
第一节 细胞遗传学实验 130
实验一 人类外周血淋巴细胞培养 130
实验二 人类外周血淋巴细胞染色体的制备 131
实验三 人类染色体G显带 133
实验四 人类G显带染色体核型分析 134
实验五 姐妹染色单体交换（SCE）标本的制备与观察 136
第二节 分子遗传学实验 138
实验六 短串联重复序列（STR）的多态性分析 138
实验七 限制性片段长度多态（RFLP）分析 143
实验八 单链构象多态性（SSCP）的检测 145
第三节 人类遗传性状分析 148
实验九 遗传性状基因型与表型分析 148
实验十 遗传病的家系分析和再发风险估计 151
第二篇 综合实验
第五章 细胞增殖活力分析 153
第一节 细胞增殖的定量分析 153
实验一 细胞琥珀酸脱氢酶活性检测（MTT法） 153
实验二 细胞周期的检测 154
第二节 细胞内ATP含量测定 155
实验三 人淋巴细胞ATP活力检测 155
第三节 细胞增殖的染色分析 156
实验四 BrdU染色法检测细胞增殖 156
实验五 Ki-67免疫染色法检测细胞增殖 157
第六章 细胞凋亡的诱导与检测 160
第一节 细胞凋亡的诱导与形态结构观察 160
实验一 培养细胞的凋亡诱导 161
实验二 锥虫蓝染色检测凋亡细胞 162
实验三 苏木精-伊红染色检测凋亡细胞 163
实验四 Giemsa染色检测凋亡细胞 164
实验五 吖啶橙荧光染色检测凋亡细胞 165
实验六 Ho.33342与PI荧光双染检测凋亡细胞 165
第二节 凋亡细胞的超微结构观察 167
实验七 透射电镜观察凋亡细胞 167
实验八 扫描电镜观察凋亡细胞 168
第三节 凋亡细胞的定量分析 169
实验九 流式细胞术检测凋亡细胞 169
第四节 细胞凋亡的分子生物学特征 171
实验十 凋亡细胞DNA ladder检测 172
实验十一 Caspase 3酶活性测定 172
实验十二 凋亡相关蛋白表达水平检测 173
实验十三 凋亡相关基因转录水平的表达检测 174
第七章 细胞自噬与相关分析 178
第一节 细胞自噬的形态学分析 178
实验一 透射电镜观察自噬体的形成 179
实验二 GFP-LC3自噬斑点的荧光显微镜检测 180
第二节 自噬标志蛋白的表达分析 181
实验三 蛋白质印迹法检测自噬标志蛋白的变化 181
第八章 真核生物基因表达调控分析 183
实验一 甲基化特异性PCR（MSP）检测基因启动子甲基化 183
实验二 荧光素酶报告基因瞬时转染分析启动子活性 186
第九章 四氯化碳致培养肝细胞损伤的分析 193
第一节 培养肝细胞损伤模型的诱导与形态学分析 193
实验一 肝细胞损伤的诱导及常规形态检查 193
实验二 损伤细胞的脂肪变性检测 194
第二节 肝细胞损伤的定量分析 195
实验三 CCK法检测细胞存活率 196
第三节 损伤肝细胞相关酶的分析 197
实验四 肝损伤细胞乳酸脱氢酶活性检测 198
实验五 肝损伤细胞谷丙转氨酶活性检测 199
实验六 肝细胞中PPAR γ1表达水平的检测 201
第十章 人遗传性状基因的分子诊断与应用 201
实验一 Duchenne型肌营养不良的基因诊断 201
实验二 多重RT-PCR检测染色体易位 202
实验三 利用短串联重复序列进行亲权鉴定 205
第三篇 创新实验
实验一 糖尿病的生化及遗传检测分析实验 207
实验二 唐氏综合征的产前诊断方法 208
实验三 家族性高胆固醇血症的诊断方法 208
实验四 血友病的诊断 210
实验五 重组人促红细胞生成素在细胞中的表达、分离和纯化 210
实验六 p53基因与肿瘤相关性实验设计 211
实验七 小鼠组织细胞形态及功能分析 212
实验八 小鼠组织特种细胞的形态及特征性成分的鉴定 212
附录
附录一 实验室规则 213
附录二 实验室安全及防护 213
附录三 实验室常用玻璃仪器的洗涤与清洁 214
附录四 生物绘图的要求与方法 217
附录五 生物学实验设计报告 218
附录六 常用实验技术原理 218