乳酸菌诱导结肠癌细胞凋亡机制研究

第一章结肠癌及乳酸菌功能关系概述

第一节引言

一、结肠癌简介

二、结肠癌发病症状

三、乳酸菌抑制结肠癌的可能途径

第二节人结肠癌的发病原因

一、结肠癌发病原因简述

二、环境化学物质诱发的结肠癌

三、饮食因素诱发的结肠癌

四、细菌酶诱发的结肠癌

第三节乳酸菌调控机体免疫功能

一、乳酸菌对非特异性免疫功能的影响

二、乳酸菌对特异性免疫功能的影响

三、乳酸菌激活机体的抗肿瘤免疫

第二章乳酸菌抗结肠癌功能研究进展

第一节乳酸菌抗结肠癌作用的机理

一、乳酸菌降低食源性致癌物质的毒性

二、乳酸菌抑制癌细胞生长及诱导癌细胞凋亡

三、乳酸菌对潜在致癌物质致癌作用的阻断

四、乳酸菌对饮食诱发结肠癌作用的阻断

第二节乳酸菌不同菌体成分抗结肠癌作用机理

一、乳酸菌的菌体细胞抗结肠癌作用研究

二、乳酸菌的菌体细胞壁抗结肠癌作用研究

三、乳酸菌的菌体细胞质抗结肠癌作用研究

四、乳酸菌的菌体代谢产物抗结肠癌作用研究

第三节乳酸菌与线粒体凋亡信号途径

一、活性氧族

二、线粒体凋亡途径

第四节国内开展的课题相关研究

第三章乳酸菌抗肿瘤研究技术方法

第一节乳酸菌抗肿瘤研究设施、材料

一、实验仪器与设备

二、实验所用试剂与药品

三、实验所用菌株与细胞

四、实验用培养液

第二节乳酸菌抗肿瘤研究检测方法

一、对结肠癌细胞增殖抑制能力的测定

二、乳酸菌对人肠道上皮细胞黏附性能的测定

三、乳酸菌对酸耐受能力的测定

四、乳酸菌对胆盐耐受能力的测定

五、乳酸菌16S rDNA 的鉴定

六、蛋白浓度的测定

七、乳酸菌肽聚糖分子量的检测

八、乳酸菌肽聚糖氨基酸组成分析

九、乳酸菌菌体和肽聚糖的形态学观察

十、HT-29细胞毒性的测定

十一、HT-29细胞形态学观察

十二、HT-29细胞DNA损伤的测定

十三、HT-29细胞凋亡与坏死的测定

十四、HT-29细胞周期的测定

十五、HT-29细胞线粒体膜电位的测定

十六、HT-29细胞ROS的检测

十七、HT-29细胞线粒体和胞浆中细胞色素C的检测

十八、HT-29细胞总RNA的提取

十九、体外反转录合成及RT-PCR反应

二十、HT-29细胞总蛋白提取与蛋白含量的测定

二十一、HT-29细胞总蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

二十二、Western blot分析

第四章乳酸菌抗肿瘤核心技术研究

一、抗结肠癌功能乳酸菌菌株的体外筛选

二、抗结肠癌功能乳酸菌菌体成分的筛选

三、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞的抑制作用

四、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡途径的研究

五、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡线粒体途径研究

六、数据处理及统计分析

第五章抗结肠癌功能乳酸菌的筛选

第一节引言

第二节基于抑制HT-29细胞增殖能力筛选抗结肠癌
乳酸菌

第三节基于乳酸菌的益生功能筛选抗结肠癌功能乳酸菌

一、乳酸菌黏附于肠上皮细胞的能力

二、乳酸菌对模拟胃液的耐受能力

三、乳酸菌对模拟小肠液的耐受能力

第四节乳酸菌菌种鉴定

第五节本章小结

第六章抗结肠癌功能乳酸菌菌体成分的筛选

第一节引言

第二节乳酸菌细胞壁和细胞质的提取及蛋白含量测定

一、考马斯亮蓝G-250标准曲线

二、乳酸菌细胞壁和细胞质蛋白质浓度计算

第三节基于抑制HT-29细胞增殖能力筛选乳酸菌
菌体成分
一、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞增殖的抑制

二、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞的毒性作用

第四节基于诱导HT-29细胞DNA损伤筛选乳酸菌
菌体成分

一、单细胞凝胶电泳实验

二、琼脂糖凝胶电泳实验

第五节基于诱导HT-29细胞凋亡筛选乳酸菌菌体成分

一、乳酸菌细胞壁和细胞质诱导HT-29细胞的凋亡

二、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞膜电位的影响

三、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞周期的影响

四、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞形态学的
影响

第六节乳酸菌细胞壁对正常细胞毒性影响

第七节本章小结

第七章乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞抑制作用

第一节引言

第二节乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞增殖的抑制

一、5-氟尿嘧啶对HT-29的毒性作用

二、MTT实验

三、台盼蓝染色实验

第三节乳酸菌肽聚糖理化性质分析

一、乳酸菌肽聚糖蛋白含量的测定

二、乳酸菌肽聚糖分子量的测定

三、乳酸菌肽聚糖氨基酸组成及含量

四、扫描电镜观察乳酸菌肽聚糖形态

五、透射电镜观察乳酸菌肽聚糖形态

第四节乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡

一、HE染色

二、Hoechst荧光染色

三、透射电镜观察乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞线
粒体的损伤

四、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞周期的影响

五、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡

第五节乳酸菌肽聚糖对正常细胞毒性影响

第六节本章小结

第八章肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡途径研究

第一节引言

第二节乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞凋亡相关基因的
影响

一、HT-29细胞总RNA的提取

二、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞凋亡相关基因的影响

三、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞Cyto-C基因表达的
影响

第三节乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡机制研究

一、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞线粒体膜电位的
损失

二、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞ROS的堆积

三、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞线粒体Cyto-C的
释放

四、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡相关蛋白的
变化

第四节本章小结

总结

展望

参考文献