石榴多酚的生物学活性研究

第1章 石榴多酚的生物学活性概述 1
1.1 石榴概述 1
1.2 石榴多酚及其主要活性成分 2
1.3 石榴多酚的生物学活性 4
第2章 石榴汁降血脂的研究 12
2.1 材料与仪器 13
2.1.1 试验材料 13
2.1.2 试验仪器 14
2.2 试验方法 14
2.2.1 实验动物及饲料配方 14
2.2.2 总酚含量的测定 15
2.2.3 黄酮类物质含量测定 16
2.2.4 原花青素含量的测定 17
2.2.5 清除DPPH自由基的能力测定 18
2.2.6 实验动物分组及处理 19
2.2.7 血清血脂指标测定 20
2.2.8 肝脏指数的测定 21
2.2.9 血液抗氧化指标的测定 21
2.2.10 主动脉弓病理切片HE染色 21
2.2.11 数据处理 21
2.3 结果与分析 22
2.3.1 石榴汁多酚类成分含量 22
2.3.2 石榴汁清除DPPH自由基的能力 23
2.3.3 石榴汁对AS大鼠血脂的影响 24
2.3.4 石榴汁对AS大鼠ALT、AST和肝脏指数的影响 25
2.3.5 石榴汁对大鼠CRP的影响 26
2.3.6 石榴汁对大鼠血清总胆汁酸的影响 27
2.3.7 石榴汁对AS大鼠动脉粥样硬化指数的影响 29
2.3.8 石榴汁对AS大鼠脂质和蛋白质氧化的影响 29
2.3.9 主动脉弓标本HE染色 31
2.4 讨论 32
2.5 小结 34
第3章 石榴多酚抑制泡沫细胞脂质积累的研究 35
3.1 材料与仪器 37
3.1.1 试验材料与试剂 37
3.1.2 试验仪器 39
3.2 试验方法 41
3.2.1 试剂配制 41
3.2.2 石榴皮多酚提取物高效液相色谱分析 43
3.2.3 小鼠巨噬细胞Raw264.7的培养 43
3.2.4 石榴皮多酚对小鼠巨噬细胞Raw264.7存活率的影响 44
3.2.5 Raw264.7巨噬泡沫细胞模型的建立 45
3.2.6 石榴皮多酚对Raw264.7泡沫细胞内胆固醇蓄积的影响 45
3.2.7 石榴皮多酚对泡沫细胞清道夫受体基因mRNA表达的影响 47
3.2.8 石榴皮多酚对泡沫细胞清道夫受体蛋白表达的影响 53
3.2.9 数据处理与统计分析 57
3.3 结果与分析 57
3.3.1 HPLC鉴定石榴皮多酚组成成分 57
3.3.2 石榴皮多酚对Raw264.7巨噬细胞的安全浓度 57
3.3.3 Raw264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立 59
3.3.4 石榴皮多酚对泡沫细胞内胆固醇含量的影响 60
3.3.5 石榴皮多酚对泡沫细胞清道夫受体CD36和SR-A mRNA和蛋白表达的影响 63
3.3.6 对PPARγ的影响 67
3.4 讨论 69
3.5 小结 72
第4章 石榴多酚促进泡沫细胞胆固醇流出的研究 73
4.1 材料与仪器 81
4.1.1 试验材料 81
4.1.2 试验仪器 81
4.2 试验方法 83
4.2.1 试剂配制 83
4.2.2 Raw264.7巨噬泡沫细胞模型的建立 83
4.2.3 石榴皮多酚对ApoA-1及HDL介导的泡沫细胞胆固醇流出影响 83
4.2.4 石榴皮多酚对泡沫细胞胆固醇流出相关基因表达的影响 84
4.2.5 胆固醇流出相关基因引物设计 84
4.2.6 细胞ACAT和nCEH 蛋白表达及其酶活性的检测 85
4.2.7 数据处理与统计分析 85
4.3 结果与分析 86
4.3.1 石榴皮多酚对ApoA-1及HDL介导的泡沫细胞胆固醇流出影响 86
4.3.2 石榴皮多酚对泡沫细胞ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达影响 87
4.3.3 石榴皮多酚对泡沫细胞SR-B1蛋白表达影响 91
4.3.4 石榴皮多酚对泡沫细胞LXRα基因表达影响 92
4.3.5 石榴皮多酚对泡沫细胞ACAT和nCEH的影响 96
4.4 讨论 99
4.5 小结 102
第5章 安石榴苷、鞣花酸和没食子酸抑制泡沫细胞形成的研究 103
5.1 材料和仪器 104
5.1.1 试验材料 104
5.1.2 试验仪器 104
5.2 试验方法 106
5.2.1 试剂配制 106
5.2.2 PC、EA和GA对Raw264.7巨噬细胞存活率的影响 106
5.2.3 PC、EA和GA对泡沫细胞胆固醇蓄积和流出的影响 107
5.2.4 PC对泡沫细胞胆固醇流入和流出相关蛋白表达的影响 108
5.2.5 统计分析 108
5.3 结果与分析 109
5.3.1 PC、EA、GA对小鼠巨噬细胞Raw264.7的安全浓度 109
5.3.2 PC、EA和GA对泡沫细胞内胆固醇含量的影响 110
5.3.3 PC、EA和GA对泡沫细胞清道夫受体CD36基因蛋白表达的影响 113
5.3.4 PC、EA和GA对泡沫细胞胆固醇流出的影响 115
5.3.5 PC、EA和GA对Raw264.7巨噬泡沫细胞PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1蛋白表达的影响 117
5.4 讨论 120
5.5 小结 122
第6章 石榴鞣花酸抗肺癌的研究 123
6.1 材料与仪器 124
6.1.1 试验材料 124
6.1.2 试验仪器 124
6.2 试验方法 125
6.2.1 石榴鞣花酸提取物溶液配制及细胞培养 125
6.2.2 细胞增殖抑制试验 126
6.2.3 DAPI染色法分析细胞形态 126
6.2.4 细胞周期的检测 127
6.2.5 细胞凋亡率的检测 127
6.2.6 细胞内蛋白表达量的测定 128
6.2.7 数据分析 129
6.3 结果与分析 130
6.3.1 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞增殖的抑制作用 130
6.3.2 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞形态的影响 131
6.3.3 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞周期的影响 132
6.3.4 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞凋亡的影响 133
6.3.5 蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达量的结果 135
6.4 小结 137
附录 缩写词中英文对照表 138
参考文献 141