527年，拜占庭的第一位强势皇帝查士丁尼一世上台，发动了对波斯的战争。

528年，波斯大将扎基西斯率军3万，先发制人，向拜占庭军队发动猛攻，于次年在尼亚比斯以压倒性的优势逼退拜占庭将领贝利撒留。翌年，双方军队在两河的德拉城展开决战，由于波斯方面的失误，拜占庭以弱胜强，取得了此次战争的胜利。

532年，双方签订停战协议，拜占庭撤回德拉城的驻军，为了能够进一步保障东部的稳定，查士丁尼一世在战争胜利的情况下，反而向波斯支付了1000磅黄金，希望能和波斯讲和。

在解决了东部的威胁以后，查士丁尼一世开始了他的宏大计划。533年，查士丁尼一世派贝利撒留出征非洲，对汪达尔人展开攻势。虽然他带去的军队不足2万，但是在当地向导以及贝利撒留的迂回战术下，汪达尔人根本无法有效抵挡贝利撒留，于534年投降，汪达尔王国灭亡。拜占庭帝国占据了非洲北部广大的畜牧基地。随后，拜占庭借东哥特人内部出现王位纷争之机，将战争的矛头指向了东哥特人。535年，拜占庭军队对达尔马提亚发动了进攻，未果。此后贝利撒留由西西里岛登陆，并迅速占领了那不勒斯。536年，贝利撒留占领罗马，538年，拜占庭军队占领米兰。查士丁尼恢复罗马帝国昔日疆域的宏伟计划似乎有了实现的可能，但就在此时，波斯发动了对拜占庭的战争。

库思老一世违背与拜占庭签订的和约，于540年亲率大军从泰西封出发，对幼发拉底河一带的拜占庭军队发动了突袭，先后攻下希拉波利斯、卡尔基斯，而后一路攻占到叙利亚首都安条克，并对此地进行了大肆的烧杀抢掠。543年，库思老一世进攻亚美尼亚，并于次年亲征美索不达米亚。因此，查士丁尼一世不得不于545年和波斯签订停战协议，拜占庭将所有被波斯占领的领土收回，代价是支付2000磅黄金。

但是没过多久，549年，两国又发生战争。直到562年双方再次签订和约，波斯撤军，拜占庭则向波斯每年支付黄金18000磅，有效期为50年。不仅如此，在丝绸贸易上，拜占庭也一直受制于波斯。

拜占庭帝国仍旧是丝绸制品的重要消费地。自基督教合法地位确定以后，丝绸因奢侈之风的盛行而大量被用于教会活动，拜占庭境内丝绸的消耗量在与日俱增。但是，丝绸之路的西亚段一直为萨珊波斯所控制，波斯人垄断了东西方之间的丝绸贸易，严禁东方民族和西方民族进行直接的丝绸贸易，拜占庭所消耗的丝织产品基本上都是通过萨珊波斯获得的，为此拜占庭帝国不得不付出高额的代价。